1.該模型制備比較成熟，國內外都有此模型，構建和評價指標一致，所以該模型應用廣泛，具有統一的操作規程。

2. 該模型制備的關鍵：1）小鼠必須是重度免疫缺陷的，而且飼養環境必須潔凈；2）HIV操作需要生物安全。

3.此模型具有完善的人的免疫系統，HIV感染后，具有艾滋病病人相似的臨床癥狀，所以具有很高的比較醫學應用價值。

1、 SIVmac239靜脈感染恒河猴外周血病毒載量結果

8只SIVmac239靜脈感染恒河猴血漿載量變化規律基本一致（圖1）。Rid1、Rid3、Rid7、Rid9、Rid12、Rid13在SIVmac239感染后4d就檢出病毒載量陽性，Rid5、Rid10兩只感染猴在SIVmac239感染后7d檢出病毒載量陽性。隨后，8只SIVmac239靜脈感染恒河猴在感染后11d-14d達到高峰，峰值在106至107 copies/mL之間，隨后迅速下降。8只感染猴在感染后42d-210d之間載量保持穩定水平，其中，Rid7、Rid13兩只感染猴在此期間血漿病毒載量維持在104 copies/mL左右；Rid1、Rid3、Rid5、Rid9、Rid10、Rid12六只感染猴在此期間血漿病毒載量仍保持在較高水平，約為105至106copies/mL之間。

圖1 SIVmac239靜脈感染中國恒河猴外周血病毒載量結果

Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma)in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SIVmac239

1、 SIVmac239靜脈感染恒河猴CD4+/CD8+比值結果

8只SIVmac239靜脈感染恒河猴CD4+/CD8+比值均在感染后10d之內發生應激性增高，隨后迅速下降，維持在各自的穩定水平。Rid7感染猴在感染后112天CD4+/CD8+比值發生倒置，之后一直維持在1.0以下。其余7只感染猴均未出現CD4+/CD8+比值倒置（圖2）。

圖2 SIVmac239靜脈感染中國恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴細胞比值

Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaquesinfected intravenously with SIVmac239

SIVmac239靜脈感染恒河猴CD4+ T細胞絕對數

8只SIVmac239靜脈感染恒河猴后在感染后CD4+ T細胞絕對數均迅速下降，至感染后11d CD4+ T細胞絕對數下降至最低，隨后迅速回彈，再緩慢下降，維持在各自穩定的水平。其中，Rid1感染猴在感染150d后CD4+ T細胞絕對數下降至200個/μL左右，Rid7感染猴在感染154d后CD4+ T細胞絕對數下降至100個/μL左右，兩只感染猴的CD4+ T細胞絕對數維持在較低水平（圖3）。

圖3 SIVmac239靜脈感染中國恒河猴外周血CD4+T淋巴細胞絕對數

Fig.3 The CD4+T cell counts (per l blood) in Chinese-origin rhesus macaques infectedintravenously with SIVmac239

1、 實驗用病毒：感染毒株為SIVmac239中國恒河猴細胞適應株，使用中國恒河猴PBMCs擴增制備，CEMx174細胞滴定TCID50為3×105/mL。

2、 感染動物：選用體重4-6kg的SPF恒河猴。實驗前體檢無異常，必須排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆轉錄D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴細胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相關的4種基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）篩查結果為陰性。所有感染動物必須在ABSL-3室中進行。

3、 感染方法：將SIVmac239病毒原液1:100稀釋至1 mL，經后肢靜脈接種恒河猴。

4、 SIVmac239靜脈感染猴樣品采集和指標測定：在感染前和感染后10、17、24、28、42、56、84天采集EDTA抗凝血4mL，分別測定血常規、血漿病毒載量、CD4+/CD8+、CD4+細胞絕對數。

5、 SIVmac239靜脈感染猴血漿病毒載量的測定：提取EDTA抗凝血漿中病毒RNA，使用SYBR Green I 實時熒光定量RT-PCR方法測定血漿病毒載量。

6、 SIVmac239靜脈感染猴外周血CD4+/CD8+比值及絕對數測定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗體標記EDTA抗凝全血淋巴細胞，流式細胞儀測定CD4+/CD8+比值，并根據血常規結果，計算出CD4+T細胞絕對數。

一、 艾滋病概述

艾滋病(AcquiredImmunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human ImmunodeficiencyVirus, HIV）引起，以全身免疫系統嚴重損害為特征的傳染性疾病，是20世紀危害人類健康和生命最嚴重的病毒性疾病之一。自美國CDC報道首例艾滋病后，到20世紀80年代中期艾滋病發展成為一個性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690萬人，2014年新增感染者200萬，2014年因艾滋病死亡120萬人。艾滋病在1985年傳入我國，截至2015年5月31日，歷年累計報告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成為關注的公共衛生和社會熱點問題，艾滋病的預防與治療也成為當代生物醫學研究的前沿熱點之一。

二、艾滋病動物模型簡介

艾滋病發病機制研、藥物和疫苗的保護性研究及評價等方面在很大程度上依賴理想的動物模型。人們發現HIV以后，用HIV感染過多種動物，但由于種種原因，結果并不理想。研究發現猴免疫缺陷病毒(SIV)感染實驗用猴的模型效果比較理想，表現為和AIDS的臨床表征，發病過程、免疫缺陷特征等非常相似，加之HIV和SIV有一定的基因同源性，人和猴的生物學特性也較其他動物接近，因而，SIV/SAIDS(猴艾滋病)模型被廣泛接受和應用。

SIV是猴獲得性免疫缺陷綜合征（SimianImmune Deficiency Syndrome，SAIDS）的主要致病病毒，為典型的C型病毒粒子，基因組長度大約為9.2kb，基因組成同HIV-1和HIV-2基本相同，其完整的原病毒基因含有二個LTR以及同HIV類似的基因：gag、pol、vif、tat、rev、env和nef。所有基因在SIV的排列順序同HIV完全一樣。目前國內外對SIV的研究多集中在非克隆株SIVmac251和克隆株SIVmac239上，因為這兩個病毒株能在多種獼猴屬動物身上引發致死性免疫缺陷綜合征，同時伴有CD4+淋巴細胞下降，繼發機會性感染病毒性腦膜腦病。這些都與人類AIDS類似。

艾滋病的三種傳播途徑分別是經血液、性和母嬰傳播，性傳播包括同性傳播和異性傳播兩種方式。艾滋病動物模型的制備首先要考慮其實際應用價值，最好的動物模型可以最大限度的模擬人類疾病，包括使用與自然感染相同或接近的方式建立模型。為充分模擬靜脈注射吸毒人群的感染方式，通過靜脈途徑，病毒直接感染血液中的靶細胞，從而制備靜脈途徑艾滋病恒河猴感染模型。