到目前為止，已經(jīng)報(bào)道有2種非人靈長類動物（恒河猴、食蟹猴）和4種嚙齒類動物（大鼠、小鼠、田鼠、沙鼠），雪貂、家貓以及雞、鴨等禽類可以作為H5N1禽流感病毒動物模型用于實(shí)驗(yàn)研究。低致病性H5N1禽流感病毒可以通過適應(yīng)建立鼠肺適應(yīng)株感染小鼠建立小鼠模型。非人靈長類動物通過鼻腔吸入較難感染，通常需要借助輔助器材進(jìn)行定位感染，動物感染后體征變化不顯著，肺組織出現(xiàn)局灶性病變。

前期研究顯示雪貂的受體分布情況與人極為接近，呼吸氣道長，上下呼吸道分腔明顯是流感病毒研究最為理想的動物模型，缺點(diǎn)是雪貂受物種特異性限制缺乏相應(yīng)的檢測試劑。小鼠對多種流感病毒敏感，一直被選擇作為流感病毒研究的動物模型，不僅有完備的檢測試劑，還有相應(yīng)的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機(jī)制方面的研究。早期研究曾在多種非人靈長類動物中（非洲綠猴、Pata猴、豬尾猴、食蟹猴）檢測到血清抗體陽性，并推測猴群感染病毒參與了流感大流行。研究發(fā)現(xiàn)非人靈長類動物感染禽流感病毒后的臨床改變、病理變化、抗原分布都與人類存在一定差異，研究結(jié)果顯示其對流感病毒敏感性較雪貂、小鼠低。至今沒有直接證據(jù)表明非人靈長類動物的受體分布情況與人接近。恒河猴中研究局部肺組織損傷機(jī)制不僅與巨噬細(xì)胞有關(guān)，在研究抗補(bǔ)體機(jī)制中還應(yīng)考慮PAMP的參與，NF-κB 等炎癥信號途徑的作用，這些研究在非人靈長類中受到一定限制，目前小鼠可以提供多方面抗補(bǔ)體機(jī)制研究。

受體比較

1) 人呼吸道上皮受體分布情況：α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體主要分布在鼻粘膜上皮細(xì)胞, α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體分布在鼻旁竇、咽、氣管、細(xì)支氣管上皮上。在終端呼吸性細(xì)支氣管上皮細(xì)胞也表達(dá)α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體。α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體出現(xiàn)在呼吸細(xì)支氣管與肺泡交界的無纖毛立方細(xì)支氣管細(xì)胞上，部分肺泡壁細(xì)胞表達(dá)這種受體，這種細(xì)胞為肺泡Ⅱ型細(xì)胞。病人感染H5N1禽流感病毒后，病毒主要分布在肺泡Ⅱ型細(xì)胞內(nèi)。

2) 雪貂除了氣管中極少數(shù)杯狀細(xì)胞既表達(dá)α-2，3SA受體又α-2，6SA受體，其上下呼吸道受體分布與人極為相似，小鼠多表達(dá)α-2，3SA受體，α-2，6SA受體較少，曾局限的認(rèn)為小鼠較適合用于α-2，3SA受體結(jié)合的病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對小鼠的致病力和復(fù)制能力。

3)有研究顯示通過體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)非洲綠猴上皮細(xì)胞與人類流感病毒和禽類流感病毒都有較好的結(jié)合能力，與人類上皮細(xì)胞的結(jié)合能力接近。缺乏實(shí)驗(yàn)證據(jù)顯示其受體與人類受體分布相似度。

6.2感染途徑比較

1) 小鼠、雪貂通過輕微麻醉后，以吸入式方式感染，感染方式與人極為接近。

2) 恒河猴、綠猴、食蟹猴等需要以環(huán)甲膜穿刺、支氣管鏡定位感染等方式進(jìn)行感染，感染途徑與自然感染途徑差別較大，感染效果通常會出現(xiàn)肺組織局域性灶狀感染，與吸入性感染方式產(chǎn)生的病變程度、范圍存在一定差別。

感染后癥狀

1) 部分禽流感病毒在猴上皮細(xì)胞中復(fù)制受限或者發(fā)生不同程度的衰減。例如禽來源的H2N2病毒不能感染猴，H5N1高致病性禽流感病毒需要以高出雪貂感染劑量103倍的劑量感染猴，仍不致死，僅產(chǎn)生一過性體溫升高。

2) 幾乎所有禽流感病毒都能夠在雪貂中成功復(fù)制，并產(chǎn)生臨床可觀察的改變，例如體溫升高、體重下降、噴嚏、流涕、精神萎靡甚至死亡。

3)H5N1禽流感病毒感染小鼠后出現(xiàn)嚴(yán)重的肺炎，除呼吸道以外還在腦、脾、肝等組織中發(fā)現(xiàn)病毒抗原，并在腦組織中出病理改變，猴感染后在呼吸道以外的組織中未發(fā)現(xiàn)病毒抗原。

CRP基因敲除小鼠和人CRP轉(zhuǎn)基因小鼠在賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司模式動物研究中心完成，該中心具有符合國際標(biāo)準(zhǔn)的動物模型制備相關(guān)完備監(jiān)督管理制度。動物的繁殖及感染模型評估在中國疾控中心動物中心完成，所有操作在SFP級別下遵守二級生物安全管理規(guī)定進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)動物尸體實(shí)行無害化處理，對生態(tài)環(huán)境無影響。

1. 雪貂模型感染后臨床癥狀變化

雪貂在實(shí)驗(yàn)前1周測正常體溫和體重，確定正常值，感染組雪貂在H7N9病毒接種的第1~2天使體溫升高，體溫升高0.5~2℃，體溫升高持續(xù)3天左右，臨床無死亡現(xiàn)象。雪貂感染后出現(xiàn)流涕、打噴嚏、呼吸困難、攝食減少、精神萎靡、活動度下降，對外界刺激無反應(yīng)等臨床表現(xiàn)。傳播組雪貂在合籠后第11天開始出現(xiàn)較明顯的體重下降，體溫?zé)o明顯變化，有雪貂出現(xiàn)流涕、噴嚏的現(xiàn)象。

圖1 H7N9感染與傳播組雪貂體重變化率、體溫變化情況

圖2H7N9感染與傳播組雪貂臨床評分

2. 雪貂模型感染后病毒在組織中復(fù)制情況

病毒感染雪貂后第1天到第5天，用RT-qPCR方法可從鼻甲骨活檢物（鼻拭子）中檢測到病毒載量。從雪貂的鼻甲骨標(biāo)本、肺組織標(biāo)本中，經(jīng)MDCK細(xì)胞培養(yǎng)，接種細(xì)胞產(chǎn)生典型細(xì)胞病變（CPE），提示病毒感染了雪貂并由病毒的復(fù)制和排毒，鼻甲骨標(biāo)本分離陽性的高峰期在1~5天。傳播組1/3雪貂合籠后5-7天在鼻拭子中檢測到病毒。感染組解剖雪貂可在鼻甲、氣管、肺、腎、腸、眼組織中分離到活病毒，此結(jié)果證明H7N9病毒可以在呼吸道以外的組織氣管中復(fù)制、繁殖。用HA方法可證實(shí)MDCK細(xì)胞有H7N9抗原存在。

圖3 H7N9感染與傳播組雪貂鼻拭子病毒滴度

3. 雪貂模型感染后血清特異性抗體產(chǎn)生情況

在H7N9病毒接種前和接種后第5天安樂時，經(jīng)靜脈采血1mL分離血清，檢測血清中H7N9病毒特異性抗體。感染組雪貂在5天安樂死時，均為陰性；在21天取血時，均為陽性。傳播組雪貂在合籠第21天血清中抗體檢測為陽性。

表1 H7N9感染與傳播組雪貂血清抗體水平

Table 1 The antibody level of H7N9 infected and exposed ferrets

雪貂呼吸道解剖結(jié)構(gòu)上下呼吸道分腔明顯，受體分布與人極為接近，是迄今為止最為敏感的流感病毒感染動物模型。它對人流感病毒高度易感，病毒不經(jīng)適應(yīng)即能使雪貂致病，并易傳播給雪貂和人。在自然條件下，雪貂一般也是通過呼吸道吸入病毒的方式感染流感病毒，其感染后的發(fā)病過程和機(jī)體反應(yīng)也與人體相似。雪貂除對人流感病毒高度易感外，對禽流感、豬流感病毒也十分敏感，且感染后出現(xiàn)典型癥狀。

分子生物學(xué)研究顯示，這是由于雪貂的呼吸道上皮細(xì)胞表面存在人流感病毒特異性受體α2,6糖鍵連接的唾液酸，而其肺泡上皮細(xì)胞表面也存在著禽流感病毒特異性受體α2,3糖鍵連接的唾液酸。

概括起來，相較于其他流感動物模型，雪貂的優(yōu)勢為 ：（1）雪貂感染流感病毒后的癥狀、發(fā)病機(jī)制和免疫反應(yīng)與人類極為相似。（2）人甲、乙型流感病毒均可自然感染雪貂，這為在完全控制的群體內(nèi)觀察流感的傳播規(guī)律和流感病毒抗原性的漂移和轉(zhuǎn)變提供了可能。（3）雪貂的氣管較長，這樣就使其上、下呼吸道區(qū)室化，有利于研究流感病毒對呼吸道不同區(qū)域的效應(yīng)差異。（4）雪貂作為動物模型比嚙齒類大，易于監(jiān)測其體溫、脈搏和呼吸頻率。（5）在小型動物中，雪貂是唯一感染甲型流感病毒后自然出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)的動物模型。基于此，目前雪貂作為理想的流感動物模型已被廣泛應(yīng)用于流感發(fā)病機(jī)理等各方面的研究，為人類流感研究做出了重要貢獻(xiàn)。

去勢雪貂（Mustela Pulourius Furo），4-10月齡，500-1000克。實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行血清學(xué)檢查，HI方法檢測血清H7N9、H1N1、H5N1抗體，抗體陰性為合格雪貂方可入組實(shí)驗(yàn)。

病毒株為A/Anhui/1/2013 (H7N9)，經(jīng)血凝抑制（HI）實(shí)驗(yàn)，篩選出6月齡以下對當(dāng)下流行的H1N1、H3N2、H5N1、H7N9亞型流感病毒相應(yīng)血清抗體均為陰性的去勢雪貂。為了使動物適應(yīng)并降低應(yīng)激反應(yīng)，所有雪貂均在感染前一周進(jìn)行體溫芯片的皮下植入和實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)（使用掃描儀監(jiān)測體溫，BMDS, USA）。感染組通過肌肉注射鹽酸塞拉嗪對雪貂進(jìn)行麻醉，輕度麻醉后感染組每只雪貂經(jīng)鼻接種病毒。在感染組旁邊設(shè)置傳播組，感染組在感染24小時后放入傳播籠中傳播組的鄰近籠。感染組和傳播組于感染（合籠）后第0-14天連續(xù)測量體溫、體重并記錄臨床癥狀以進(jìn)行評分；在接種（合籠）病毒1d后，每天收集鼻甲骨活檢物（鼻拭子）標(biāo)本，進(jìn)行病毒分離和載量測定；感染后第5天感染雪貂安樂處死，尸檢時取肺、氣管、肝、脾、腦、腸、心和腎組織，進(jìn)行病毒滴度測定和組織病理學(xué)檢查。

2013 年3月31日，依據(jù)《國際衛(wèi)生條例（2005）》，中國政府報(bào)告上海和安徽發(fā)現(xiàn)3例人感染新型甲型H7N9禽流感病毒（以下簡稱H7N9）病例。在隨后的幾個月內(nèi)，以華東地區(qū)為代表的我國多個省市陸續(xù)確診并報(bào)道多例H7N9禽流感病毒感染人造成重癥肺炎甚至死亡的病例，這是世界首次發(fā)現(xiàn)的新型重配H7N9禽流感病毒所致的人感染疫情，引起了廣泛關(guān)注。

H7N9禽流感病毒是由H7 的HA 基因，N9 的NA 基因以及H9N2 病毒的6 個內(nèi)部基因片段重配而成的新型病毒。對目前已公布了全基因組的若干H7N9禽流感患者分離株的序列分析結(jié)果顯示，該病毒具有與之前其他亞型甲型流感病毒類似的遺傳特征，包括對禽類低致病性，感染哺乳動物的能力增強(qiáng)，對金剛烷胺類抗病毒藥物耐藥，以及對神經(jīng)氨酸酶抑制劑（如奧司他韋和扎那米韋）敏感。

人感染H7N9禽流感病毒后，臨床表現(xiàn)包括發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難、乏力、肌肉酸痛、咯血及胃腸道癥狀，初始癥狀并不包括鼻塞和流涕。97%的患者出現(xiàn)肺炎，超過70%的患者發(fā)生急性呼吸窘迫綜合癥（ARDS），部分患者繼而進(jìn)展為頑固性低氧血癥和多器官功能衰竭并導(dǎo)致最終死亡。少數(shù)病例為輕癥，均為兒童，常常僅有發(fā)熱表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果顯示，患者外周血白細(xì)胞正常或減少，淋巴細(xì)胞減少，血小板缺乏，以及肝酶輕度升高。約60%的病例具有各種并發(fā)癥，如冠心病、糖尿病、高血壓和慢性阻塞性肺病。病例以老年人（平均年齡62歲）和男性（69%）居多。

研究顯示，活禽市場是人感染H7N9 禽流感病毒的可能來源。活禽暴露是人感染的關(guān)鍵風(fēng)險因素，導(dǎo)致患者感染的主要暴露方式為直接接觸染毒的活禽、被其排泄物污染的環(huán)境或物品。然而，目前從不同患者體內(nèi)分離到的病毒株基因組序列存在一定的差異，其進(jìn)化源頭似乎并不相同，因此目前報(bào)道的這些病例極有可能是一些獨(dú)立的感染事件。流行病學(xué)調(diào)查也為這一論點(diǎn)提供了部分佐證。目前已確診的人感染病例多為散發(fā)，彼此間沒有明顯的流行病學(xué)關(guān)聯(lián)。盡管如此，目前仍有三起疑似家庭聚集案例的報(bào)道。

基因進(jìn)化分析顯示，H7N9 禽流感病毒是一種新型重配病毒。雖然各基因片段分別與近期東亞地區(qū)流行的禽流感病毒同源性較高，但這種基因組成之前從未在禽、人或其他動物中發(fā)現(xiàn)過。其HA 基因可能源于我國長三角地區(qū)鴨群中的H7 亞型禽流感病毒，NA基因的來源目前尚無定論，早期研究認(rèn)為其源于歐亞遷徙的候鳥，最新研究則指出它與2010-2011年間途徑香港境內(nèi)的候鳥分離到的H11N9和H2N9病毒高度同源。盡管如此，目前無異議的一致的結(jié)論是，野鳥在H7N9 禽流感病毒傳播中可能扮演重要角色，鴨群則在將H7N9相關(guān)病毒從野鳥傳至家禽的過程中，起到至關(guān)重要的中間宿主作用。