1. 該模型鑒定和評(píng)價(jià)的技術(shù)方法和指標(biāo)體系，符合潰瘍性結(jié)腸炎的病理特點(diǎn)，尤其與潰瘍性結(jié)腸炎反復(fù)發(fā)作、遷延不愈的臨床特點(diǎn)高度相似。

（1） 疾病活動(dòng)指數(shù)

（2） 結(jié)腸指數(shù)

（3） 結(jié)腸組織大體評(píng)分

（4） HE 染色病理觀察

（5） MPO 酶活性檢測(cè)

2. 與國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有模型的異同

現(xiàn)有的潰瘍性結(jié)腸炎的造模方法有單一化學(xué)法刺激、免疫法、免疫復(fù)合法、基因修飾法。雖然現(xiàn)在建造UC動(dòng)物模型的方法多種多樣，但是依舊存在著或多或少的缺陷。理想模型要簡(jiǎn)單易操作，同時(shí)盡可能全面、準(zhǔn)確的模擬人類(lèi)UC的病理生理學(xué)特點(diǎn)和表現(xiàn)，既要與自發(fā)的炎癥誘因相近，又要符合腸道炎癥進(jìn)展、組織損傷進(jìn)展等，同時(shí)模型病變盡量維持較長(zhǎng)時(shí)間，能盡量反映慢性病變的過(guò)程和特點(diǎn)，以滿足實(shí)驗(yàn)的需求。而目前尚缺乏能滿足這些要求的模型，且已有模型以急性損傷模型為主。故亟待尋找更好的，具有良好重復(fù)性、穩(wěn)定性，并且操作簡(jiǎn)單的動(dòng)物模型，從而為研究UC發(fā)病機(jī)制、研發(fā)治療新藥物提供良好的基礎(chǔ)。

3. 本研究的主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)或技術(shù)關(guān)鍵

3.1 創(chuàng)新點(diǎn)

本模型采用誘導(dǎo)劑聯(lián)用的方法，建立慢性、炎癥維持時(shí)間長(zhǎng)且病程穩(wěn)定的小鼠慢性 UC 造模方法。該模型改進(jìn)了傳統(tǒng)潰瘍性結(jié)腸炎模型的病程短、穩(wěn)定性差、模型指標(biāo)缺少特異性等問(wèn)題，更大程度的模擬了臨床慢性潰瘍性結(jié)腸炎病理指標(biāo)。

3.2 關(guān)鍵技術(shù)

采用噁唑酮和2,4,6-三硝基苯磺酸兩種誘導(dǎo)劑聯(lián)用、致敏與感染相結(jié)合的方法，建立了新慢性、炎癥維持時(shí)間長(zhǎng)且病程穩(wěn)定的小鼠慢性 UC 模型方法。

4. 可行性分析

4.1 前期摸索研究充分，通過(guò)閱讀大量中外文獻(xiàn)，較充分的了解潰瘍性結(jié)腸炎疾病以及模型建立過(guò)程中的問(wèn)題。

4.2 實(shí)驗(yàn)單位具備動(dòng)物飼養(yǎng)許可證以及較先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)器材和檢測(cè)設(shè)備。

4.3 通過(guò)閱讀大量中外文獻(xiàn)和走訪調(diào)研，噁唑酮和三硝基苯磺酸在臨床上應(yīng)用廣泛，效果明顯，具有可行性。

本實(shí)驗(yàn)采用昆明種6-8周齡的健康成年小鼠，體重均在33±2g，SPF級(jí)。飼料墊料均為高壓滅菌產(chǎn)品，購(gòu)自北京斯貝福生物科技股份有限公司，動(dòng)物用水為實(shí)驗(yàn)室制UP水經(jīng)過(guò)除菌處理。飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)操作均于具有檢驗(yàn)合格資質(zhì)的SPF級(jí)屏障動(dòng)物室內(nèi)進(jìn)行，并且實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以完整的包裝直接進(jìn)入屏障實(shí)驗(yàn)室，觀察室適應(yīng)7天后無(wú)異常情況，方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所有實(shí)驗(yàn)中小鼠均引頸處死，盡量減少動(dòng)物手術(shù)創(chuàng)傷程度及失血量。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物操作均符合動(dòng)物倫理學(xué)規(guī)范，對(duì)環(huán)境和生態(tài)影響等符合國(guó)家相關(guān)法律規(guī)定。

1、模型評(píng)價(jià)體系

（1）疾病活動(dòng)指數(shù)（disease activity index，DAI）：自造模后的第一日起，每天觀察并記錄大鼠的體質(zhì)量、糞便性狀及隱血狀況并分別對(duì)其進(jìn)行評(píng)分，求得 DAI 值。質(zhì)量降低百分比為 1% 以下記為 0 分；降低百分比為 1% 到 5% 分以內(nèi)記為 1 分；降低百分比為 5% 到 10% 以內(nèi)記為 2 分；降低 10% 到 15% 以內(nèi)記為 3 分；降低 15% 以上記為 4 分。糞便干燥堅(jiān)硬記為1 分；松散不黏肛周記為 2 分；稀便記為 3 分；水樣瀉記為 4 分。隱血弱陽(yáng)性記為 1 分，陽(yáng)性記為 2 分，強(qiáng)陽(yáng)性記為 3 分，肉眼血便記為 4 分。三者得分求其平均值，即為 DAI 值。

（2）結(jié)腸指數(shù)（colonindex，CI）：造模周期結(jié)束后將小鼠頸椎脫臼處死，立即打開(kāi)腹腔，分離全段結(jié)腸，并沿腸系膜縱軸剪開(kāi)，分離出內(nèi)容物，用生理鹽水沖洗兩次，濾紙吸干，準(zhǔn)確稱取結(jié)腸濕質(zhì)量。結(jié)腸指數(shù)即結(jié)腸濕質(zhì)量與體質(zhì)量的比值。 CI=m/M×100%（m：結(jié)腸質(zhì)量；M：小鼠體質(zhì)量）

（3）結(jié)腸組織大體評(píng)分（colonmacroscopic damage index，CMDI）：模型誘導(dǎo)結(jié)束后，小鼠頸椎脫臼處死，打開(kāi)腹腔從肛門(mén)向上的一段結(jié)腸，沿腸系膜縱軸剪開(kāi)，冰生理鹽水沖洗干凈，置于濾紙上，腸黏膜向上展開(kāi)，觀察結(jié)腸大體形態(tài)、結(jié)腸黏膜損傷情況，大體形態(tài)損傷評(píng)分參照 Luketal標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行：0分：結(jié)腸無(wú)損傷；1分：結(jié)腸輕度水腫但沒(méi)有潰瘍；2分：充血而且腸黏膜粗糙呈顆粒狀；3分：結(jié)腸黏膜潰瘍形成，直徑約 0~1 cm；4分：結(jié)腸黏膜潰瘍形成，直徑約1~2 cm，但腸管與外周臟器無(wú)黏連；5分：潰瘍直徑1~2 cm，腸管增厚，與周?chē)K器黏連嚴(yán)重。

（4）免疫組化染色檢測(cè)IL-4、TNF-α 表達(dá)水平：截取1.0cm結(jié)腸組織較嚴(yán)重部位立即放入4%多聚甲醛中浸泡24h以上，脫水、透明、修整組織快，浸蠟2h，石蠟包埋。取石蠟組織塊，石蠟切片之后按照免疫組化染色步驟對(duì)石蠟切片進(jìn)行目標(biāo)因子染色，觀察并比較陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)水平情況。

2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1小鼠一般情況及結(jié)腸大體形態(tài)

2.1.1 小鼠一般情況

各組小鼠在致敏期間，進(jìn)食均正常，精神活躍，毛色光亮，大便正常，呈棕色或棕褐色。在模型誘導(dǎo)期間小鼠均表現(xiàn)出不同程度的稀便，膿血便，體質(zhì)量大幅度下降，精神萎靡不振，毛色暗淡。模型誘導(dǎo)成功之后，小鼠仍毛色暗淡，有不同程度稀便，甚至便中帶血，偶有小鼠精神仍欠佳，但總體狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)。

2.1.2 小鼠結(jié)腸大體形態(tài)

正常組小鼠結(jié)腸無(wú)任何充血、水腫及潰瘍發(fā)生。模型組小鼠結(jié)腸均呈不同程度充血、水腫及潰瘍，并且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，小鼠的結(jié)腸仍然存在不同程度的損傷。

2.2 疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)分

按照DAI評(píng)分表對(duì)各組小鼠進(jìn)行評(píng)分，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，四周的模型組DAI評(píng)分高于正常組小鼠，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（見(jiàn)表2）。

2.3 結(jié)腸指數(shù)（CI）評(píng)分

與N組CI值相比，M組CI評(píng)分均高于N組，其中除二、三、四M組小鼠CI評(píng)分與N組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（見(jiàn)表2）。

2.4 結(jié)腸組織損傷大體評(píng)分（CMDI）

參照小鼠結(jié)腸病變?nèi)庋墼u(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)小鼠結(jié)腸進(jìn)行評(píng)分，后經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，與N組CMDI值相比，各M組CMDI評(píng)分均高于N組，并且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（見(jiàn)表2）。

2.5 免疫組化染色檢測(cè)IL-4、TNF-α表達(dá)水平

通過(guò)免疫組化技術(shù)對(duì)結(jié)腸組織切片染色發(fā)現(xiàn)，N組結(jié)腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)均清晰完整。TNF-α 與IL-4在模型中均有較少表達(dá)。四組M組結(jié)腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)紊亂，腺體增多或者丟失，隱窩結(jié)構(gòu)破環(huán)，黏膜下層均有大量IL-4及TNF-α陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。在顯微鏡10*40倍視野下隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行拍照，分別計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

Fig1 the immunohistochemical expression level of IL-4 and TNF-α in 4 weeks of colonic tissue in mice A: normal group；B：M1 model group；C：M2 model group；D：M3 model group；E：M4 model group；F：the gross morphology of the colon after two months 1：the immunohistochemical expression of IL-4； 2：the immunohistochemical expression of TNF-α（10*40）

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雄性昆明小鼠，6~9周齡，體質(zhì)量均在30 g左右，SPF級(jí)，購(gòu)自北京斯貝福生物科技股份有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境

飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)均于SPF級(jí)屏障動(dòng)物室內(nèi)進(jìn)行。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

噁唑酮（oxazolone，OXZ）、2，4，6-三硝基苯磺酸（2，4，6-trinitrobenzene

sulfonic acid，TNBS），均購(gòu)自Sigma公司；白細(xì)胞介素-4（interleukin-4，IL-4）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）抗體，均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.4 檢測(cè)儀器

HITACHI UV 9100型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本Hitachi Limited公司；Tacan Safire2多功酶標(biāo)儀，意大利Tecan公司；ASP-200全自動(dòng)組織脫水機(jī)，德國(guó)Leica公司；LeicaRM2245輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，德國(guó)Leica公司；WG-136電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，天津市泰斯特儀器有限公司；OLYMPUS-BH-2顯微鏡，日本OLYMPUS株式會(huì)社；Waters 600液相色譜儀，Empower化學(xué)項(xiàng)目合作單位，2996 DAD檢測(cè)器，美國(guó)waters公司。

2實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程

人流線路：工作人員進(jìn)入第一更衣室→脫去個(gè)人外衣（飾品）放入衣柜→脫去藍(lán)色拖鞋后(→淋浴室)進(jìn)入第二更衣室→穿上拖鞋→手消毒（75%的酒精消毒）→按操作規(guī)范穿上無(wú)菌連體衣，戴上一次性無(wú)菌口罩、手套→進(jìn)入緩沖間→風(fēng)淋→進(jìn)入清潔進(jìn)入飼養(yǎng)室或檢疫室→所有工作結(jié)束后→進(jìn)入污物走廊、脫掉紅色拖鞋→進(jìn)入緩沖間→穿上藍(lán)色拖鞋，進(jìn)入洗刷、消毒區(qū)域，走廊→進(jìn)入潔凈區(qū)域工作→進(jìn)入飼養(yǎng)室或檢疫室→所有工作結(jié)束后→進(jìn)入污物走廊、脫掉紅色拖鞋→進(jìn)入緩沖間→穿上藍(lán)色拖鞋，進(jìn)入洗刷、消毒區(qū)域，取掉手套、口罩、連體衣，分別放入指定的回收桶中→進(jìn)入第一更衣室，穿上個(gè)人衣（飾）→出屏障系統(tǒng)。

物流線路：物品→高壓蒸汽滅菌器或傳遞窗或渡槽→消毒傳遞間→清潔準(zhǔn)備室→清潔走廊→飼養(yǎng)室或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室→污物經(jīng)包裝處理→（后室緩沖間）→次清潔走廊→氣閘（緩沖間）→清洗消毒室→外部區(qū)域。

動(dòng)物流線路：外來(lái)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物→傳遞窗→消毒傳遞間→清潔準(zhǔn)備室→清潔走廊→飼養(yǎng)室或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室→生產(chǎn)繁殖或?qū)嶒?yàn)處理后→（后室緩沖間）→次清潔走廊→氣閘（緩沖間）→清洗消毒室→外部區(qū)域。

3 實(shí)驗(yàn)方法

選取24只健康成年昆明小鼠，6~8周齡，體質(zhì)量30g左右，隨機(jī)分為兩組，正常對(duì)照組（N組，n=12）和模型組（M組，n=12）。模型組小鼠腹部剃毛（2 cm×2 cm），模型組第1~2天腹部涂抹2.4%的噁唑酮（溶于無(wú)水乙醇）0.2ml進(jìn)行過(guò)敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，第5天禁食不禁水24h，第6天用長(zhǎng)度約8cm的一次性注射膠管表面涂抹液體石蠟，灌腸給予0.4%噁唑酮（40%的乙醇溶解）0.1ml，第7天灌腸給予0.3%的三硝基苯磺酸（40%的乙醇溶解）0.1ml。緩慢將膠管拔出，捏住肛門(mén)，倒立小鼠兩分鐘防止液體流出。7d之后的兩種灌腸劑具體灌腸順序、劑量及溶劑如Fig.1和Tab.1。

P1~P4：the four induced period of the model；O：OXZ；T：TNBS.Fig.1 The induced cycle diagram of the chronic ulcerative colitis model

Tab.1 The induced dose of chronic ulcerative colitis model induced by OXZ and TNBS

Note：P1~P4：the four induced period of the model.

1. 研究目的及意義

本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模方法采用噁唑酮（oxazolone, OXZ）、2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid, TNBS）序貫給藥灌腸，誘導(dǎo)制備小鼠遷延性潰瘍性結(jié)腸炎模型，區(qū)別于單用噁唑酮或2,4,6-三硝基苯磺酸等化學(xué)藥品造成的急性模型，癥狀和病理變化僅維持3-5天，而本方法可維持1-2個(gè)月，大大的延長(zhǎng)了模型的持續(xù)時(shí)間，同時(shí)也提高了造模的穩(wěn)定性和所模擬疾病特征性病變的持久性，更符合臨床潰瘍性結(jié)腸炎慢性遷延、反復(fù)發(fā)作的特征，對(duì)開(kāi)展?jié)冃越Y(jié)腸炎病因、病機(jī)和治療藥物的相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究具有重要意義。

2. 潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型的國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis, UC）又稱慢性非特異潰瘍性結(jié)腸炎，與克羅恩病同屬于炎癥性腸病（inflammatory bowel disease, IBD）[1-2]，其病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未明確，目前國(guó)內(nèi)外研究主要集中于免疫、遺傳、環(huán)境及感染等因素，患者臨床以粘液、膿血便等消化系統(tǒng)的癥狀為主，病情反復(fù)發(fā)作，遷延不愈，嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量，甚至可能導(dǎo)致結(jié)腸癌[3]。UC的顯微鏡下病理特征主要為：隱窩結(jié)構(gòu)異常，上皮細(xì)胞異常以及炎癥浸潤(rùn)。黏膜炎癥彌漫性分布，發(fā)病時(shí)主要臨床表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、黏液膿血便、里急后重，并出現(xiàn)血沉、中性粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞的增多[4]。人類(lèi)潰瘍形成是個(gè)緩慢的過(guò)程，由于其難愈性、易復(fù)發(fā)性的特點(diǎn)而成為現(xiàn)代難治性疾病之一。目前關(guān)于該疾病的實(shí)驗(yàn)室研究模型尚不成熟，且多為急性損傷和病理模擬，缺乏良好的慢性長(zhǎng)期的動(dòng)物模型，無(wú)法準(zhǔn)確的反映人類(lèi)臨床UC慢性遷延、反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)[5]。建立UC動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇很廣泛，大鼠、小鼠、兔等多種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都可，但方法各不相同。目前存在的造模方法有如下幾種：

2.1 化學(xué)法

2.1.1 乙酸刺激

楊永剛[6]等人采用乙酸灌腸成功建立潰瘍性結(jié)腸炎模型，張忠[7]用經(jīng)肛門(mén)注入0.5 g/L肥皂水0.15 mL, 約30 min后用2g/L戊巴比妥鈉經(jīng)腹腔麻醉，插入直徑3 mm的聚乙烯纖維導(dǎo)管至小鼠直腸內(nèi)深度約為1~2 cm，注入8%乙酸溶液0.15 mL的方法，結(jié)果乙酸組結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞萎縮、壞死、脫落，成腸壁變薄，皺襞消失，黏膜下淋巴細(xì)胞增生并有淋巴濾泡形成。張曉峰[8]研究發(fā)現(xiàn)乙酸誘導(dǎo)UC動(dòng)物模型的作用機(jī)理與乙酸直接刺激使血管通透性增加，激肽激活，溶解纖維蛋白活性增加以及凝血機(jī)制障礙有關(guān)。乙酸誘導(dǎo)UC模型制作方法簡(jiǎn)單，成本低，短期內(nèi)可使小鼠出現(xiàn)UC明顯的癥狀及典型病理變化，是目前實(shí)驗(yàn)性UC模型中應(yīng)用最廣泛的模型之一，適合于臨床研究UC的發(fā)病機(jī)制以及新藥的研制開(kāi)發(fā)。但由于乙酸直接刺激造成結(jié)腸黏膜和血管的損傷，與臨床致病因素有較大差異，且最初黏膜損傷的非特異性炎癥呈現(xiàn)急性過(guò)程，不能表現(xiàn)人類(lèi)UC所具有的慢性，復(fù)發(fā)的特點(diǎn)[9]。

2.1.2 DSS法

葡聚糖硫酸鈉 (dextran sulphate sodium,DSS) 是一種肝素樣硫酸多糖體，1958 年Ohkusa[10]最早利用倉(cāng)鼠建立，閆曙光[11]采用2%葡聚糖硫酸鈉口服2周建立潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型，Trivedi [12]通過(guò)給Swiss小鼠連續(xù)7d自由飲用3.0%DSS水溶液，之后連續(xù)14d給予普通飲水，最后再連續(xù)7d給予3.0%DSS水溶液建立DSS的慢性UC模型。但是DSS誘導(dǎo)的潰瘍模型個(gè)體差異比較明顯，且為短期急性模型，不適宜研究慢性UC引發(fā)的結(jié)腸癌相關(guān)問(wèn)題。

2.2 復(fù)合法

2.2.1 惡唑酮模型(oxazolone,OXZ)+乙醇

惡唑酮是一種半抗原物質(zhì)[13]，其誘導(dǎo)UC模型先致敏然后進(jìn)行灌腸給藥，用惡唑酮溶液對(duì)小鼠灌腸,小鼠5d后即可出現(xiàn)腸道炎癥[14]，結(jié)腸肉眼可見(jiàn)黏膜充血水腫, 糜爛潰瘍, 鏡下見(jiàn)結(jié)腸黏膜潰瘍。7d左右病情好轉(zhuǎn)，10d左右基本痊愈。利用惡唑酮建立潰瘍性結(jié)腸炎模型，速度較快，重復(fù)性好且制作簡(jiǎn)單，但是疾病維持時(shí)間相對(duì)較短，小鼠模型有自愈傾向，缺少慢性過(guò)程，對(duì)于慢性復(fù)發(fā)性潰瘍性結(jié)腸炎的模擬度不高。

2.2.2 三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)+乙醇

采用異戊巴比妥麻醉，一定量TNBS緩慢灌腸可以誘導(dǎo)急性腸炎Wistar大鼠模型；15d以后再次給予定量TNBS灌腸可以造成復(fù)發(fā)性結(jié)腸炎，可以造成復(fù)發(fā)性結(jié)腸炎[15-16]，三硝基苯磺酸與乙醇灌腸一次致炎是目前最為常用的潰瘍性結(jié)腸炎模型建立方法，具有以上其他建模方法所沒(méi)有的優(yōu)點(diǎn)。

2.3 免疫復(fù)合法

2.3.1 免疫復(fù)合物+TNBS+乙醇

譚琰等[17]實(shí)驗(yàn)證實(shí)，與TNBS+乙醇誘導(dǎo)的結(jié)腸炎動(dòng)物模型相比，增加免疫復(fù)合物進(jìn)行復(fù)合誘導(dǎo)的方式更符合T/B淋巴細(xì)胞混合作用的要求，而且炎癥持續(xù)的時(shí)間延長(zhǎng)了3~4個(gè)星期。崔國(guó)寧[18]研究免疫復(fù)合法建立的大鼠UC模型表現(xiàn)穩(wěn)定，重復(fù)性好，病變持久，發(fā)病機(jī)制與人類(lèi)UC相似，是較為理想的模型。康宜兵等[19]研究示免疫復(fù)合建立的模型成功率高，重復(fù)性好，與人類(lèi)的UC相似，是較為理想的模型。具體方法：取20只SD大鼠，隨機(jī)分為模型組和空白組，每組各10只，模型組給予抗原乳化液于大鼠的背部、頸部皮下，第23天灌腸TNBS/50%乙醇，空白組以生理鹽水代替，比較各組大鼠的大便性狀、體重、便血等，并進(jìn)行組織學(xué)檢查。由此可以看出，本法建立大鼠 UC 模型持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng)，潰瘍的形成，與炎性反應(yīng)都有體現(xiàn)，符合臨床UC的病理要求，但缺點(diǎn)是比較繁瑣。

2.3.2 免疫復(fù)合物+乙酸

吳玉泓[20]采用局部乙酸刺激替代TNBS+乙醇灌腸，免疫致敏方法與上述相似，同樣起到了模擬人類(lèi)UC慢性活動(dòng)性的特點(diǎn)，也適宜于觀察和評(píng)價(jià)藥效。

2.4 討論

UC模型最常見(jiàn)的造模方法為化學(xué)法、復(fù)合法及免疫復(fù)合法等，DSS液、TNBS液是化學(xué)法中最常用的誘導(dǎo)劑，對(duì)造模成功與否所用到的評(píng)價(jià)指標(biāo)主要有：疾病活動(dòng)指數(shù)、結(jié)腸指數(shù)、結(jié)腸組織大體評(píng)分[21-22]、MPO酶活性檢測(cè)[23]，以及形態(tài)學(xué)觀察和免疫組化學(xué)染色細(xì)胞觀察[24-25]等。目前對(duì)于潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型的誘導(dǎo)大部分屬于急性病發(fā)式炎癥，偶有慢性模型誘導(dǎo)的方法，雖然現(xiàn)在建造UC動(dòng)物模型的方法多種多樣，但是依舊存在著或多或少的缺陷，現(xiàn)階段的UC模型遠(yuǎn)不能滿足科學(xué)研究的需要，故尋找更好，更方便，更符合人類(lèi)潰瘍疾病的模型尤為重要。本實(shí)驗(yàn)方法[26-27]將OXZ與TNBS聯(lián)合灌腸給藥，按照一定周期誘導(dǎo)小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型可維持一個(gè)月，使UC模型更接近人類(lèi)UC發(fā)病機(jī)制及臨床癥狀，通過(guò)控制小鼠的性別、體重、健康飼養(yǎng)狀況、實(shí)驗(yàn)環(huán)境與條件等環(huán)節(jié)，觀察小鼠的行為改變情況、免疫組化、炎癥因子的表達(dá)情況，為進(jìn)一步研究UC的發(fā)病機(jī)制，防治方法提供符合臨床實(shí)際的、標(biāo)準(zhǔn)的、可重復(fù)的、可控易行的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，為慢性潰瘍性結(jié)腸炎模型的研究提供了可靠的數(shù)據(jù)支持和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，是臨床UC治療藥物研究的重要基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1] 張晶娜,陶磊,張俊,王木嶺,陳瑩,劉衡,張成桂,何苗.美洲大蠊提取物Ento-A對(duì)濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠的改善作用研究[J].中國(guó)藥房,2020,31(01): 35-41.

[2]趙曼, 高峰. 潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2010, 10(16): 3160-3165.

[3]Lakatos PL, Lakatos L. Risk for colorectal cancer in ulcerative colitis:changes, causes and management strategines [J]. World J Gastroenterol, 2008,14(25): 3937-3947.

[4]郭 倩, 唐志鵬, 王麗娟. 潰瘍性結(jié)腸炎組織病理學(xué)診斷的研究進(jìn)展[J]. 世界華人消化雜志, 2014, 22(2): 190-196.

[5]鄭文瀟,吳翔.潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J].中國(guó)病原生物學(xué)雜志,2016, 11(09):861-864+867.

[6]楊永剛,王丹丹,張艷秋,王明星.猴頭菌多糖對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠腸道短鏈脂肪酸含量的影響[J].中國(guó)藥房,2019,30(20):2763-2767.

[7]張忠,程富勝,賈寧,車(chē)清明,尹鳳琴,祝艷華.小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的建立及病理組織學(xué)比較[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào),2012,20(06):69-72+99.

[8]張曉峰.細(xì)胞因子與潰瘍性結(jié)腸炎[J].河北醫(yī)學(xué), 2001, 7 (5) :465-467.

[9]霍麗娟, 趙和平.實(shí)驗(yàn)性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的研究[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 35 (5) :467-470.

[10] 閆曙光,惠毅,李倩,李京濤,魏海梁.黃連-干姜提取物對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸上皮TLR4/NF-κB信號(hào)通路的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2020,26(04): 70-75.

[11]Ohkusa T. Production of experimental ulcerative colitis in hamsters by dextransulfate sodium and changes in intestinal microflora[J].Nihon Shokakibyo GakkaiZasshi,1985,82(5):1327-36

[12] Trivedi PJ,Bruns T,Ward S,et al.Intestinal CCL25expression is increased in colitisand correlates with inflammatory activity[J].J Autoimmun,2016(68): 98-104

[13] Friedlaender M H, Cyt R, Contactsensitivity in the guinea pig eye[J].Curr Eye

Res,1981, 1 (7) :403.

[14] 沈可欣,馬淑榮,李巖,等.惡唑酮誘導(dǎo)小鼠炎性腸病模型的建立[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2012(10):1804-6.

[15] Wang YH,Ge B,Yang XL,etal.Proanthocyanidins from grape seeds modulates the nuclear factor-kappa Bsignal transduction pathways in rats with TNBS-induced recurrent ulcerativecolitis[J].Int Immunopharmacol,2011,11 (10):1620-7.

[16] Li XL,Cai YQ,Qin H,et al.Therapeuticeffect and mechanism of proantho- cyanidins from grape seeds in rats withTNBS-induced ulcerative colitis[J].Can J Physiol Pharmacol,2008,86(12):841-9.

[17]譚琰,三硝基苯磺酸/乙醇與免疫復(fù)和物聯(lián)合誘導(dǎo)的結(jié)腸炎動(dòng)物模型及其免疫機(jī)制的探討[D].華中科技大學(xué),2008.

[18]崔國(guó)寧,劉喜平,董俊剛,曾慶濤.潰瘍性結(jié)腸炎模型建立方法研究進(jìn)展[J].今日藥學(xué),2018,28(04):280-284.

[19]康宜兵,呂永慧,吳宇金,鐘志勇,武昕.免疫復(fù)合型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2015,36(10):55-57.

[20]吳玉泓,李海龍,段永強(qiáng),吳建軍,王宏偉,魏彥明.免疫致敏結(jié)合局部乙酸刺激法建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào),2010,18(01):65-68+65.

[21]Graeme P Young，D.James B.St John，Sidney J Winawer，et al.Choice of fecal occult blood tests for colorectalcancer screening: recommendations based on performance characteristics inpopulation studies[J]. The American Journal ofGastroenterology. 2002 (10)

[22]Wang Zhi-xue，DongBing，F(xiàn)eng Zi-fang，et al. A study on immune- omodulatory mechanism ofpolysaccharopeptide mediated by TLR4 signaling pathway[J]. BMC Immunol，2015，16（1）：34.

[23]Itana de Mattos，Pintoe Passos，Renata Lopes Britto.Diagnosisand treatment of müllerian malformations[J].Taiwanese Journal of Obstetrics & Gynecology, 2020, 59(2).

[24]徐立,胡瑞斌,李兆波,等. STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠胰腺及肝臟石蠟切片HE染色改進(jìn)方法[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2019,35(09):1122-1124.

[25] Hilip Alex，Nicholas C Zachos，Thuan Nguyen，et al. Distinct cytokinepatterns identified from multiplexprofiles of murine DSS and TNBS-induced colitis[J]. NIH Public AccessAuthor Manuscript，2009，15（3）：341-352.

[26]宋曉敏,張丹參,莊忠寶,張海威,蘇曉梅,趙凱燕,張力.噁唑酮與三硝基苯磺酸聯(lián)用誘導(dǎo)小鼠慢性潰瘍性結(jié)腸炎模型[J].神經(jīng)藥理學(xué)報(bào),2016,6(03):17-23.

[27] 張丹參,王倩,田慧,薛貴平,張力.大黃栓制劑對(duì)兩種潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠的作用研究[J].神經(jīng)藥理學(xué)報(bào),2015,5(01):19-37.