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條件性ABHD6 過表達小鼠模型

健明迪檢測提供的條件性ABHD6 過表達小鼠模型,討論與結論 該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型,待其到40周齡時,檢測其dsDNA等,結合皮膚癥狀變化,來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立,具有CMA,CNAS認證資質。
條件性ABHD6 過表達小鼠模型
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討論與結論

該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型,待其到40周齡時,檢測其dsDNA等,結合皮膚癥狀變化,來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型,為研究狼瘡皮膚病發病機制提供了工具。

生物安全性

模型動物飼養在武漢大學人民醫院動物房SPF級動物實驗室,實驗動物使用許可證SYXK(鄂)2015-0027。

(1)建筑特點

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時針走向設計。屏障系統內共有大鼠飼養室1間,小鼠飼養室3間,隔離觀察室1間,實驗準備室1間,潔物存放室1間,清洗消毒室1間。此外,屏障系統外配有監控室、機房和配電室等。

(2)設計參數

室內溫度:20~26°C;日溫差:≤4°C;相對濕度:40%~70%;換氣次數:15~20次/h;氣流速度:≤0.2m/s;壓強梯度:20~50Pa;空氣潔凈度:7級;菌落數:≤3個/皿;氨濃度:≤14mg/m3;噪聲:≤60dB;Z低工作照度:≥200lx;動物照度:15~20lx;晝夜明暗交替時間:12/12h。

(3)通風和空調系統

動物實驗室采用全新風中央空調通風系統。空氣經過初、中、三級過濾器后進入實驗室內環境。

(4)照明系統

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動物飼養室、實驗準備間、隔離觀察室和功能實驗室等安裝有手動和自動開關,根據實際需要,調節控制室內照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點和晚上8點開啟紫外線燈照射1h。

(5)通訊系統

因為SPF級動物實驗室的環境和設施具有特殊要求,人員進入后不能隨意出入,而室內外的聯系又十分重要,故室內各房間均安裝內部電話機,按照房間順序編排電話號碼,各室內電話可相互連通,并均與監控室總機保持聯系,保證實驗室內外信息的及時溝通。

(6)監控系統

對SPF級動物實驗室的出入口、走道、實驗動物飼養室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉的攝像機,能夠及時了解設施的運行狀態;也能有效督促實驗人員執行科學的操作規程,避免人為因素造成室內環境和設施的污染;并對整個實驗期間的動物狀態和反應進行觀察,減少對動物的滋擾。

(7)供水系統

SPF級實驗動物飲用水以純凈水為宜。本實驗室采用管道供水,將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統內實驗準備室,設置接水槽,為實驗動物供應滅菌的飲用水和屏障系統內用水。要經常更換和清洗輸水管道,清洗籠具的用水添加適當比例的84消毒液。

(8)供電系統、警報系統和消防設施

SPF級動物實驗室要求全天候不間斷供風和供電,如果出現故障,不能及時發現和處理,就可能導致環境設施的污染、動物感染或死亡,造成嚴重后果。因此應對SPF級動物實驗室使用獨立穩定的供電系統,并配備有應急電源。在中央空調機房控制室安裝風機故障警報系統,以便及時檢修和維護,保證設施的安全運行。

(9)消毒滅菌設備

為防止外界物品進入SPF級動物實驗室時所攜帶的細菌污染室內環境和造成動物交叉感染,按照不同物品的特性,進行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或專用的機動門真空滅菌器消毒。

(10)動物飼養籠具

飼養大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具,具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm,適用于單籠飼養有特殊要求的實驗動物,配有底盤和食槽,確保實驗動物有充足的采食和活動空間,同時也保證室內環境的清潔。

(11)墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時,墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物,起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術后的恢復、生長發育和繁殖性能。目前,所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

(12)飼料配制

大小鼠的生產型飼料和維持型飼料必須嚴格按照國家標準,進行科學配制生產。每半年檢測一次飼料的微生物指標和有效營養成分指標,保證飼料的質量。

評價驗證

ABHD6基因表達廣泛表達的絲氨酸水解酶α/β-水解酶結構域6 ,是單酰甘油(MAG)水解酶,參與調節多種生理和病理過程,包括胰島素分泌、脂肪褐變、食物攝入、神經傳遞、自身免疫性疾病、神經和代謝性疾病以及癌癥。ABHD6影響了小鼠和人類的BMP代謝。

制備方法

F0代構建:采用Cas9進行基因定點敲入。

研究背景

ABHD6基因表達廣泛表達的絲氨酸水解酶α/β-水解酶結構域6 ,是單酰甘油(MAG)水解酶,在中樞和外周組織中調節信號活性MAG,在內源性大麻素信號轉導中具有重要功能。ABHD6及其底物MAG似乎參與調節多種生理和病理過程,包括胰島素分泌、脂肪褐變、食物攝入、神經傳遞、自身免疫性疾病、神經和代謝性疾病以及癌癥。不同的細胞靶點,如哺乳動物unc13-1 (Munc13-1)、PPARs、GPR119和CB1/2受體,已經在不同的細胞類型中展示了MAG介導的信號傳導過程。研究表明,ABHD6在體內和體外都具有甘油磷脂酸(BMP)水解酶活性,ABHD6影響了小鼠和人類的BMP代謝。小鼠ABHD6導致肝臟BMP含量升高,在高脂飲食(HFD)喂養下進一步升高。此外,它參與細胞內囊泡運輸、能量和脂質代謝以及腫瘤轉移。ABHD6沉默可通過抑制遷移、侵襲、轉移和體內腫瘤生長來限制非小細胞肺癌(NSCLC)的發展。ABHD6阻斷不能影響內源性大麻素系統,但可顯著誘導細胞內MAG積累,抑制腫瘤病理生理,激活PPARα/γ信號。

模型信息

中文名稱:條件性ABHD6 過表達小鼠模型

英文名稱:ABHD6 conditional over-expressing mouse model

類型:代謝性疾病動物模型

分級:NA

用途:用于代謝相關疾病模型。

研制單位:中國醫學科學院醫學實驗動物研究所

保存單位:中國醫學科學院醫學實驗動物研究所

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