造模后各大鼠體重降低，攝食量減少,排便量增多、出現(xiàn)稀便和無定形軟便，自主運動量減少，結腸推進率加快。其病理生理特征與臨床研究結果基本吻合。建模之前，正常組與模型組之間的結腸運動指數(shù)、2h排出的糞粒數(shù)以及玻璃小球排出時時間均無差異；給藥前，與正常組比較，模型組結腸MI明顯增加，差異非常顯著（P<0.05），模型組大鼠排出的糞粒數(shù)明顯增加，差異顯著（P<0.05），模型組大鼠玻璃小球排出時間縮短，差異非常顯著（P<0.05）；中藥方劑治療7 d后能夠明顯改善動物的PI-IBS癥狀。大鼠體重、攝食量增加，排便量減少、稀便減少，自主運動量接近正常。給藥后，中藥方劑中高劑量組較模型組MI顯著降低（P<0.05）；中藥方劑低中高劑量組大鼠糞粒數(shù)較模型組顯著降低（P<0.05）；中藥方劑各給藥組較模型組大鼠玻璃小球排出時間明顯增加，差異非常顯著（P<0.05）。

炎癥后腸易激綜合征（PI-IBS）是一種慢性腸道功能性疾病，一般繼發(fā)于急性胃腸道感染后。本課題研究采用了乙酸灌腸聯(lián)合束縛應激法建立的PI-IBS大鼠模型，在建模過程中，模型大鼠在灌注乙酸的前三天均出現(xiàn)腹瀉的癥狀，隨著時間的延長，各組大鼠腹瀉癥狀均有不同程度的緩解。該方法可顯著增強大鼠的結腸運動，導致排便及大便性狀異常，同時結腸黏膜完整，無器質(zhì)性損害，在病理結構上無明顯改變。本動物模型模擬了臨床上PI-IBS患者的大部分典型癥狀，因此本研究所采用的乙酸灌腸聯(lián)合束縛應激法建立的PI-IBS大鼠模型可以作為研究IBS的動物模型。

參考文獻:

[1]La JH, Kim TW, Sung TS, Kang JW, Kim HJ, Yang IS. Visceral hypersensitivity and altered colonic motility after subsidence of inflammation in a rat model of colitis. World J Gastroenterol. 2003 Dec;9(12):2791-5.

[2]Williams CL, Villar RG, Peterson JM, Burks TF. Stress-induced changes in intestinal transit in the rat: a model for irritable bowel syndrome. Gastroenterology. 1988 Mar;94(3):611-21.

[3]Iwa M, Matsushima M, Nakade Y, Pappas TN, Fujimiya M, Takahashi T. Electroacupuncture at ST-36 accelerates colonic motility and transit in freely moving conscious rats. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2006 Feb;290(2):G285-92.

本實驗采用健康SPF級SD大鼠，經(jīng)中國中醫(yī)科學院中藥研究所動物倫理委員會批準，符合動物倫理學3R原則。動物飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學院中藥研究所SCXK(京)2011-0012，對環(huán)境和生態(tài)影響等應符合國家相關法律規(guī)定。

1動物模型評價方法

1.1大鼠體重變化

記錄各組大鼠在造模前，乙酸加束縛應激造模后，給藥后體重的變化。

1.2大鼠結腸運動

實驗前禁食24h。將橡膠小囊與直徑為2 mm的塑料導管連接，并用0號手術線扎緊，將塑料導管與三通管（一端接壓力換能器，另一端接1 mL的注射器）相連接，用注射器注入水，排凈氣泡，使整個管路密封，再將壓力換能器與Biopac MP150多導生理記錄儀相連，用Biopac MP150記錄儀記錄結腸運動的曲線。先將小囊中的水吸入注射器，用甘油潤滑橡膠小囊、導管及大鼠肛門，輕輕將小囊聯(lián)通導管從肛門插入大腸腸道7 cm，再用膠布將導管固定于鼠尾，防止滑脫。往小囊內(nèi)緩慢注入水，觀察記錄儀描記情況，選擇描記曲線最敏感時停止注射。穩(wěn)定30 min后，描記30min。然后用Biopac MP150多導生理記錄儀自帶分析軟件，以5 min為一個時間段，計算連續(xù)30 min的曲線下面積，取平均值，作為大鼠的結腸運動指數(shù)（Motility Index，MI）[3]。

1.3 大鼠2h內(nèi)排便的糞粒數(shù)

籠內(nèi)墊清潔濾紙，計算2 h內(nèi)大鼠排便的糞粒數(shù)。

1.4大鼠直腸內(nèi)玻璃小球排出時間

取玻璃小球（直徑3 mm）沿大鼠肛門放入（用橡膠管輔助）距肛門3 cm的直腸內(nèi)，后迅速移至墊清潔濾紙的籠內(nèi)喂食飲水，計時。計算直腸內(nèi)玻璃小球排出時間。

1.5數(shù)據(jù)分析

采用SPASS軟件13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)的處理，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（x±s）來表示，各組間均數(shù)比較采用t檢測，P<0.05為有差異，P<0.01為差異有顯著性。

2評價指標體系

造模后各大鼠體重降低，攝食量減少,排便量增多、出現(xiàn)稀便和無定形軟便，自主運動量減少，結腸推進率加快。其病理生理特征與臨床研究結果基本吻合。藥物治療7 d后，大鼠體重、攝食量增加，排便量減少、稀便減少，自主運動量接近正常。

2.1大鼠體重變化

模型組大鼠與正常組大鼠比較，造模后各大鼠體重降低且有顯著性差異。

2.2大鼠結腸運動

模型組大鼠與正常組大鼠比較，模型組結腸MI增加且有顯著性差異。

2.3 大鼠2h內(nèi)排便的糞粒數(shù)

模型組大鼠與正常組大鼠比較，模型組大鼠排出的糞粒數(shù)增加且有顯著性差異。

2.4大鼠直腸內(nèi)玻璃小球排出時間

模型組大鼠與正常組大鼠比較，模型組大鼠玻璃小球排出時間縮短且有顯著性差異。

3實驗結果

3.1大鼠體重的變化

各組大鼠體重在乙酸加束縛應激的造模過程中均有一定程度的增長，正常組較模型組增長快。造模后，與正常組比較，各大鼠體重明顯降低（P<0.01），給藥后，各給藥組較模型組無顯著差異，結果見圖1。

圖1大鼠體重變化(±s，n=10)

Figure1 The change of rats body weight(±s，n=10)

注：與正常組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

Annotation*P＜0.05, **P＜0.01 compared with normal group; #P＜0.05, ##P＜0.01 compared with model group

3.2大鼠結腸運動變化

建模前，正常組與模型組之間的MI無差異，造模后給藥前，模型組結腸MI較正常組明顯增加，差異非常顯著（P<0.05），給藥后，中藥方劑中高劑量組較模型組顯著降低（P<0.05），結果見圖2。

圖2大鼠MI值

Figure2The distal colonic MI of rats

注：與正常組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

Annotation*P＜0.05, **P＜0.01 compared with normal group; #P＜0.05, ##P＜0.01 compared with model group

3.3 大鼠2h內(nèi)排出的糞粒數(shù)

建模前，正常組與模型組大鼠之間2h內(nèi)排出的糞粒數(shù)無差異，建模后給藥前，模型組大鼠排出的糞粒數(shù)較正常組明顯增加，差異顯著（P<0.05），藥物治療后，匹維溴銨組及中藥方劑低中高劑量組大鼠糞粒數(shù)較模型組顯著降低（P<0.05），結果見圖3。

圖3大鼠2h內(nèi)排出的糞粒數(shù)

Figure3The number of fecal pellet output in 2 hours

注：與正常組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

Annotation*P＜0.05, **P＜0.01 compared with normal group; #P＜0.05, ##P＜0.01 compared with model group

3.4 大鼠直腸內(nèi)玻璃小球排出時間

建模前，正常組與模型組大鼠之間的玻璃小球排出時間無差異，造模后給藥前，模型組大鼠玻璃小球排出時間較正常組明顯縮短，差異非常顯著（P<0.05），藥物治療后，匹維溴銨組及中藥方劑各給藥組較模型組大鼠玻璃小球排出時間增加，差異非常顯著（P<0.05），見圖2-4。

圖2-4 大鼠直腸內(nèi)玻璃小球排出時間(s)

Figure2-4The time of the glass bead putput(s)

注：與正常組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

Annotation*P＜0.05, **P＜0.01 compared with normal group; #P＜0.05, ##P＜0.01 compared with model group

1實驗動物

SPF級SD大鼠60只，雄性，（250±20）g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，合格證號：【SCXK(京)2011-0012】。并按實驗動物使用的3R原則給予人道的關懷。

2實驗材料

乙酸（冰醋酸），分析純，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20130123；PBS;甘油。

注射器；硅膠管；膠帶；橡膠小球；導管；壓力換能器；MP150多導生理記錄儀、玻璃小球。

3分組及實驗

隨機將大鼠分為6組（n=10），分別為正常組、模型組（乙酸加束縛應激）、陽性對照組、中藥方劑低、中、高劑量組。除正常組動物外，均采用單籠飼養(yǎng)，自由飲食，12h/12h黑暗與光照交替，室溫24℃。

乙酸加束縛IBS組：各建模組大鼠均采用Jun-Ho La的方法來建立大鼠PI-IBS模型。實驗前的24h所有動物禁食，不禁水，經(jīng)大鼠肛門插入連接注射器的硅膠管（深度為距離肛門約8cm），往結腸內(nèi)灌入1mL（40mL·L-1）的乙酸，緩慢拔出硅膠管，迅速用手壓迫肛門同時將大鼠尾巴抬高30s，然后用1mL 0.01mol·L-1的PBS溶液沖洗結腸，恢復7天。乙酸刺激后的第8天用膠帶束縛大鼠的上半身（包括前肩、前上肢、胸部），限制大鼠前上肢抓撓頭面部，但不限制其活動，束縛時間為1h[1-2]。分別于建模前、給藥前及給藥后測量各指標[1-2]。

1. 目的及意義

腸易激綜合征（Irritable Bowel Syndrome，IBS）是一種常見的功能性腸道疾病，以腹痛或腹部不適伴排便習慣改變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，其發(fā)病原因迄今尚不明確，被認為是胃腸動力異常、內(nèi)臟感覺異常、腦腸調(diào)控異常、炎癥和精神心理等多種因素共同作用的結果。通過乙酸灌腸的方法，構建急性腸易激綜合征大鼠模型。為尋找防治炎癥后腸易激綜合征的有效藥物及臨床診斷和治療靶點提供參考。

2. 國內(nèi)外研究進展

目前，炎癥后腸易激綜合征主要通過三硝基苯磺酸、葡聚糖硫酸鈉、脫氧膽酸、乙酸等化學試劑誘導[1]。乙酸灌腸加束縛應激可制備急性炎癥后腸易激綜合癥[2]。該模型一方面排除了化學刺激因素導致的內(nèi)臟敏感性增高[3]，另一方面束縛應激可以引起大鼠排便的明顯增多, 表現(xiàn)出IBS的基本特征[4]，具有成本低、重復性好、模型穩(wěn)定等優(yōu)點。較好的模擬IBS的多因素發(fā)病機制，反映炎癥和應激在IBS中的作用。Cong Dai[5]等向結腸內(nèi)滴注4%醋酸和束縛應激發(fā)現(xiàn)緊密連接蛋白( ZO - 1和occludin)的表達降低，導致結腸細胞通透性增加。研究發(fā)現(xiàn)[6]乙酸誘導的PI-IBS 模型結腸運動加快，腸道 5-HT 分泌增加，近端結腸肥大細胞數(shù)目明顯增加等特征。課題組研究發(fā)現(xiàn)[7]，PI-IBS大鼠的結腸組織和腦組織內(nèi)多種腦腸肽的水平均有顯著的變化, 提示這些腦腸肽在腦-腸中可能參與IBS的病理生理過程。

參考文獻：

[1]臧凱宏,秦紅巖.感染后腸易激綜合征動物模型研究進展[J].東南大學學報(醫(yī)學版),2016,35(04):598-601.

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[4]安鈺,白殿卿,付健,孫曉寧.乙酸灌腸加束縛應激致大鼠腸易激綜合征模型的建立及其評價[J].世界華人消化雜志,2009,17(15):1548-1551.

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